776.安全第一
遠隔效應是指放射治療(RT)期間或之後放射野外腫瘤的消退，已在各種癌症中報導，例如黑色素瘤、腎細胞癌和乳腺癌。思兔sto55.com雖然其機制尚未完全闡明，但遠隔效應可能是由輻射誘導的全身免疫反應增強介導的。然而，很少觀察到遠隔效應，可能是因為癌細胞的免疫逃逸機制，包括免疫檢查點通路的激活。在過去十年中，新開發的免疫檢查點抑制劑(ICI)徹底改變了癌症治療。隨著可增強針對癌細胞的全身免疫反應的ICI 的出現，結合ICI 和放療的新治療方案有望增強遠隔效應。正在積極研究ICI 和 RT 的協同效應，並且在各種報告中都研究了這種組合增強遠隔效應的潛力。
肝細胞癌(HCC)是最常見的原發性肝癌類型，也是世界範圍內癌症相關死亡的第二大原因。早期HCC 患者接受切除、肝移植和消融等治療方式的總生存率>60%，而接受化療栓塞或全身治療的晚期 HCC 患者預後不佳。為了改善這種不良結果，最近在HCC 治療中加入並建議了新方案，包括考慮使用 ICI。因此，各種ICIs，包括程序性細胞死亡1 (PD-1)抑制劑、PD配體1 (PD-l1)抑制劑和細胞毒性T淋巴細胞相關蛋白-4 (CTLA- 4)抑制劑，在HCC患者中的可行性和安全性正在研究中。然而，報導的ICIs的客觀緩解率(orr)僅為15- 20%，仍不令人滿意。此外，最近評估派姆單抗治療晚期 HCC 患者療效和安全性的 KEYNOTE-240試驗未能顯示與安慰劑相比在總生存期和無進展生存期的改善方面具有統計學意義。由於其免疫原性引起的遠隔現象，RT 在用於提高 ICI 對晚期 HCC的療效方面受到了相當大的關注。
最近在一些臨床前實驗和臨床試驗中檢測了協同治療在控制原發性HCC 中的功效。然而，這些先前的研究沒有使用轉移性HCC 模型，而是使用原位模型，這只能觀察 RT 和 ICI 對原發腫瘤的聯合作用，而不是遠隔效應。因此，在本研究中，我們旨在使用雙側小鼠同源HCC 模型研究輻射對遠隔現象的作用和免疫學機制，以及抗PD-1 抗體對遠隔效應的影響。
使用Hepa1-6 細胞建立同系雙側HCC 小鼠模型（圖1A）。腫瘤生長曲線顯示，與未照射的腫瘤相比，使用總劑量16 Gy分兩次照射而不是在單次使用8 Gy更顯著地抑制照射腫瘤生長（P <0.001，圖 1B）和未照射的腫瘤生長（P <0.05，圖 1C）。對第31 天收穫的腫瘤進行拍照（圖1D），與單次8 Gy照射相比，分兩次總劑量16 Gy照射顯著提高小鼠的存活率（P <0.001，圖 1E)。表明在目前的HCC 模型中總劑量16 Gy分兩次照射方案適用誘發遠隔效應。
為了確定局部照射降低未照射腫瘤大小是否與免疫原性激活有關，我們對腫瘤浸潤淋巴細胞進行了流式細胞術分析(圖2A，B)。數據表明，，而不是單次8 Gy顯著增加了CD4 + IFN-γ+和 CD8 + IFN-γ+ T 細胞在照射腫瘤（P <0.001 和 P <0.05 ，圖 2C)和未照射的腫瘤（P<0.001 和 P <0.001，圖 2D）的浸潤。此外，總劑量16 Gy分兩次照射還增加了受照射腫瘤中調節性T 細胞（Treg、CD4 + CD25 + Foxp3 +）的浸潤（P<0.05，圖 2C）。
為了了解局部照射如何縮小未照射的腫瘤，我們使用流式細胞術檢測了小鼠右後腿的腫瘤引流的腹股溝淋巴結中的DCs（圖3A、B）。數據顯示，總劑量16 Gy分兩次照射顯著增加了TDLN 中活化DCs比例，這由CD40（P <0.001）和 CD80（P <0.01，圖 3C）的高表達所證明。TDLN 中 CD11c + DC 上的共抑制分子PD-L1 的表達也由總劑量16 Gy分兩次照射誘導（P <0.05，圖 3C）。此外，總劑量16 Gy分兩次照射顯著增加了CD4+ IFN-γ+和 CD8 + IFN-γ+ T 細胞（P <0.001，圖 3D），激活了TDLN 中的T 細胞。Tregs在 TDLN 中的積累在總劑量16 Gy分兩次照射組中也比單個8 Gy照射組更明顯（圖3D）。
基於顯示輻射增加TDLN DC 中 PD-L1 表達的結果，我們確定了PD-1/PD-L1 通路的阻斷是否可以進一步增強同源雙側HCC 小鼠的遠隔效應模型（圖4A）。抗 PD-1 抗體比同型IgG 對照更能抑制雙側Hepa1 6 腫瘤的生長，但差異無統計學意義。總劑量16 Gy分兩次照射抑制了受輻照（P <0.001）和未受輻照的遠側腫瘤（不顯著）的生長。與單獨放療或抗PD-1 單藥治療相比，放療和抗 PD-1 聯合治療進一步抑制了受輻射和未受輻射腫瘤的生長。用抗PD-1 抗體和輻射聯合治療的小鼠腫瘤明顯小於用輻射或抗PD-1 單一療法治療的小鼠的腫瘤（圖4D）。單獨的抗 PD-1 治療並沒有提高生存率，但與放療相結合，它顯著提高了生存率（P <0.001）。
使用CD4 和 CD8 特異性抗體的免疫組織化學顯示，與IgG 對照相比，單獨的抗PD-1 抗體和放療更顯著地增加了CD4 +和 CD8 +細胞在照射腫瘤中的浸潤（P <0.05），CD4 +細胞向未放療的對側腫瘤的浸潤（P <0.01 和 P <0.001；補充圖 2C，D）。用抗PD-1 抗體和輻射聯合治療進一步增強了CD8 +細胞向兩種腫瘤的浸潤，儘管沒有明顯的累加效應。
st🍑o55.com🎤最新最快的章節更新
對第31 天收穫的腫瘤進行流式細胞術分析（圖5A）表明，在受照射的腫瘤中，總劑量16 Gy分兩次照射，而不是抗PD-1 抗體治療更顯著增加CD4 +和 CD4 + IFN-γ+ T 細胞的浸潤（P<0.001，）。類似地，總劑量16 Gy分兩次照射增加了總CD8 +和 CD8 + IFN-γ+ T 細胞的浸潤。與單獨使用抗PD1 抗體而不是單獨使用輻射相比，用抗PD-1 抗體和輻射聯合治療進一步增強了CD4 +和 CD8 + T 細胞的浸潤。放療和抗PD-1 抗體均增加了未受照射腫瘤中的CD4 +和 CD4 + IFN-γ+ T 細胞，但不增加CD8 + T 細胞，而它們的聯合治療增加了總CD8 +和 CD8 + IFN-γ+ T 細胞超過任何一種單獨治療。與 IgG 對照治療相比，放射和抗 PD-1 抗體的組合增加了兩側腫瘤中CD25 + CD4 + Foxp3 + Tregs 的浸潤（P <0.05 和 P <0.01），而在各組之間沒有觀察到CD11c + DCs 的差異。
流式細胞術免疫表型分析顯示，CD220+ B 細胞、F4/80 +巨噬細胞、Ly6******11b +中性粒細胞、Ly6****11b + Ly6C +單核骨髓源性抑制細胞(MDSCs)和 Ly6****11b + Ly6C low粒細胞-MDSCs 的數量不受單一療法或聯合療法的影響，除了CD3 + T 細胞。
遠隔效應是一種由輻射引起的罕見現象，可以通過免疫療法得到加強。儘管放射療法和免疫療法越來越多地用於治療肝細胞癌(HCC)，但免疫療法是否可以增強遠隔效應仍不清楚。在這項研究中，旨在闡明在鼠HCC 模型中由輻射和免疫治療相結合引起的遠隔效應的免疫學機制。通過將小鼠Hepa1 -6HCC 細胞接種到具有免疫活性的C57BL/6 小鼠的兩條後腿上，建立同源HCC 小鼠模型。右後腿的腫瘤被照射，在左後腿未照射的腫瘤中觀察到遠隔效應，有或沒有抗程序性細胞死亡1 (PD-1)抗體的共同給藥。進行流式細胞術分析以分析浸潤受照射和未受照射的腫瘤以及腫瘤引流淋巴結(TDLN)的免疫細胞的分布。與單次8Gy照射相比，兩次共16Gy照射更有效地抑制了受輻射和未受輻射的腫瘤的生長，細胞毒性T 細胞的腫瘤浸潤更高。更高的劑量還增加了TDLN 中活化的樹突細胞，其具有更高的程序性細胞死亡配體1 的表達。抗PD-1 抗體的共同給藥顯著增強了遠隔效應，並增加了受照射和非照射的活化細胞毒性T 細胞的浸潤。受輻射的腫瘤。的研究結果表明，在放療中加入抗PD-1 療法可增強HCC 同源小鼠模型的遠隔效應。
紅細胞的生成是一個被嚴格調控的過程。在穩態的血細胞生成過程中，骨髓每小時大約產生1010個紅細胞，以使血紅蛋白水平維持在一個很窄的範圍內。在持續失血或溶血的情況下，紅細胞的生成可快速增加。
骨髓的紅系祖細胞是定向分化的單系祖細胞，從有雙向或多向分化潛能的祖細胞（源自一群數量極少的造血幹細胞）隨機分化而來的。
有兩種紅系祖細胞[爆式紅系集落形成單位(erythroidburst-forming unit， BFU-E)和紅系集落形成單位(erythroid colony-forming unit，CFU-E)]不能通過特定的形態學特徵予以識別，但能採用流式細胞技術予以純化和分析。有證據顯示所有造血祖細胞或幹細胞與淋巴母細胞相似。
1、局部照射減少小鼠脾臟中腫瘤引起的 Ter 細胞聚集
前期發現腫瘤誘導紅細胞祖細胞(EPCs)的產生與不良預後顯著相關，而靶向EPC或其產物可抑制腫瘤的進展。
LCC荷瘤小鼠脾腫大，放療後基本恢復正常大小。Ter119+CD71+EPCs 放療後，其比例也明顯恢復到基線水平。此外，在MC38、B16-SIY 荷瘤模型中，也觀察到了放療後Ter細胞顯著減少的現象，表明放療誘導的Ter細胞減少並不局限於某種腫瘤類型。
2、IFNs 與T細胞是輻射影響 Ter 細胞所必須的
?文獻報導放療可通過I型干擾素和T細胞觸發局部和全身抗腫瘤免疫，為了確定I型IFN在放療介導Ter細胞減少中的作用。採用 IFNAR-KO 小鼠，發現放療可使WT小鼠脾臟減小、脾細胞數量減少、Ter 細胞數量減少，但 IFNAR-KO 小鼠中該現象消失。還對比了局部照射或外源性注射干擾素治療WT小鼠腫瘤的效果，發現兩者均可減少 Ter 細胞數量。這表明I型干擾素信號途徑對於放療介導的 Ter 細胞減少是必需的。
?鑑於T細胞在放療抗腫瘤中具有一定作用，研究人員探索了T細胞在放療介導 Ter 細胞減少中的作用。採用免疫缺陷小鼠模型 RAG-KO，發現 RAG-KO 小鼠放療後Ter細胞並未減少，表明放療誘導Ter細胞減少依賴於T細胞。
?為探索是CD4或CD8亞群T細胞在其中發揮作用，採用抗體清除 CD4+或 CD8+T 細胞後，發現清除 CD8+T 細胞後，放療誘導的 Ter 細胞減少作用消失，表明是 CD8+而非 CD4+T 細胞發揮作用。
3、通過阻斷 PD-L1 可減少腫瘤誘導的依賴於 CD8+T 細胞和 IFNγ的 Ter 細胞聚集
? PD-L1 抑制劑能夠增強 CD8+T 細胞的功能。PD-L1 抑制劑能否逆轉脾臟 Ter 細胞積累？對荷瘤小鼠腹腔注射 PD-L1 抗體或進行放療，發現PD-L1 抗體或放療均抑制脾腫大和減少脾細胞，降低脾臟Ter細胞的比例和數量。
? PD-L1 抗體還減少脾臟中 ARTN 的表達，降低血清中 ARTN 的濃度。因此，PD-L1 抗體可降低腫瘤誘導的Ter細胞積累和 ARTN 的產生，且其作用依賴於CD8+T 細胞和IFN。
4、Ter 細胞和 ARTN 破壞放療或IO的療效
?體外試驗發現腫瘤細胞與 Ter 細胞共培養，或腫瘤細胞培養中外源加入 ARTN，均可增強小鼠腫瘤細胞的抗輻射能力。而 Ter 細胞和ARTN會使 CD8+T 細胞的細胞毒作用減弱。
?在體內模型中，通過過繼性轉移 Ter 細胞或外源性注射 ARTN 減弱放療和 PD-L1 抗體抗腫瘤作用。表明免疫治療和放療的治療作用部分依賴於它們對Ter細胞的抑制。
5、破壞 Ter 細胞-ARTN 軸可以促進放療或IO的療效
?破壞 Ter/ARTN 軸能夠提高放療和 PD-L1 抗體的療效。anti-Ter119 抗體耗竭小鼠Ter 細胞後放療和 PD-L1 抗體的作用提高，阻斷 ARTN 也能增強療效。
圖片
6、放療和IO應答患者顯示出治療導致的 Ter 細胞減少
?發現在接受放化療的 NSCLC 患者中，治療後沒有復發的患者治療後血液中 ARTN 濃度顯著降低，但治療後復發患者的血液中 ARTN 濃度無顯著變化。
一項臨床試驗發現患者接受放療後進行免疫治療，放療後完全或部分緩解患者的 Ter 細胞豐度顯著下降，腫瘤進展（或對治療無反應）的患者中，Ter 細胞豐度無顯著變化。表明患者對於放療和免疫治療的響應與其 Ter 細胞數量以及 ARTN 濃度相關。
?研究小結?
放療和 PD-L1 阻斷治療能夠降低腫瘤誘導產生的 Ter 細胞和 ARTN 水平，機制層面，放療和 PD-L1 阻斷治療可使體內發生由干擾素、DCs 和 CD8+ T 細胞介導的先天和適應性免疫應答，這些應答也是治療充分發揮療效所必需的，同時，阻斷 Ter 細胞-ARTN 軸可以促進放療和抗 PD-L1 治療的效果。